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各种组织特殊染色法―中国印染网弹性纤维染色

发布时间:05-05 12:53   来源:印染在线  点击:   发表评论

  弹性纤维主要由弹性蛋白(一种黄色硬蛋白,它是黄色弹性纤维组织的主要成分,干燥时易脆,而湿润时呈弯曲并富弹性)构成。它广泛分布于全身的各个部位,尤以循环系统,呼吸系统和皮肤系统为甚。新鲜时它呈黄色,固又称为黄色纤维。弹性纤维较细,直径0.2-1.0um,有分支,不成束。但可交织成网。它富有弹性,容易拉长,但不能拉到超过它的极限,外力除去后又恢复原状。弹性纤维与胶原纤维交织在一起,在HE染色的标本上,含量少时不易与胶原纤维区别,含量多时呈折光性强的淡粉红色。由弹性蛋白构成弹性纤维的鞘,并非完全的密封,在其周围有许多微细孔,这些微细孔可作为营养物及排除废物的场所。

弹性纤维主要来源于带有平滑肌特征的间胚叶细胞,少量可由脉管的内皮细胞产生,先形成前――弹性蛋白(pro-elastin),这时在电镜下可见到直径为200nm的电子密度微纤维,在成熟的弹性纤维蛋白,电密度减少或丧失中国印染网,较为均匀一致。
弹性纤维与胶原纤维,网状纤维不同,它极难容于有机或无机的溶液里。
(一)弹性纤维的变形和病理变化
随着年龄的增长,特别是到了老年的时候,弹性纤维可发生生理性的变化,这时可观察到弹性纤维的纵行分裂,断成碎片,最后成为颗粒,这些变化同时也伴有化学变化,氨基酸和钙的含量有所增加,这些变化在皮肤是最明显的。当有病变的时候,我们便可在切片观察到有的弹性纤维增生,有的被破坏,断裂、崩解,失去弹性。如主动脉瘤,就可见到瘤壁上的弹性纤维已经失去了弹性。这是由于主动脉壁的弹性纤维受到内压的不断冲击,弹性纤维过度牵拉,超过它的极期,再也恢复不了原状,因此在切片标本上(特殊染色)只能见到其痕迹或反应物。
(二)弹性纤维的染色方法
1.Weigert氏雷锁辛品红法(1898)(Weigerts resorcin-fuchsin method)试剂的配制:
Wergert氏雷锁辛品红液:
碱性品红 2g
雷锁辛 4g
蒸馏水 200ml
30%三氯化铁 25ml
取500ml的烧瓶加入蒸馏水和雷锁辛,用玻棒搅拌均匀,加热直至沸腾,持续1-2min,再加入30%的三氯化铁水溶液继续搅拌直至煮沸2-3min后,此时溶液的颜色变为紫罗蓝色,冷却后过滤。倒去滤液,将滤纸和沉淀物一起放入烤箱中一起烤干。取200ml95%酒精,将滤纸与沉淀物一起放入加热溶解,除去滤纸,冷却后过滤,用95%酒精凑足200ml,再加入4mlHCL。即可使用,保存于4℃冰箱,可长期使用。
操作方法:
⑴切片脱蜡至水,
⑵0.5%高锰酸钾水溶液氧化5min,
⑶水洗,
⑷2%草酸漂白1-2min,
⑸水洗,
⑹入95%酒精,
⑺入Weigert氏雷锁辛液,室温染1-2h,
⑻95%酒精分化至背景清晰为止,
⑼Van Giesson氏液或核固红作对比染色,
⑽脱水透明,封固。
结果:弹性纤维:深蓝或深黑色,其余成分视用何种对比染色而定。
该法特点:
①可将微细弹性纤维显示出来。
②方法可靠,颜色鲜红色,切片可保存。
③配制好的染液可使用较长时间。

注意事项:
①1908年H art应用该法,将1%HCl酒精稀释了Weigert氏原液。即原液5-20ml。酸酒精30-40ml。结果弹性纤维显示蓝色――黑色。
②1929年French改良了这种方法,用Weigert氏原液中的2g品红,改为1g结晶紫。结果弹性纤维显示深蓝――绿色。
③1929年Sheridan改良了该法,Weigert氏原液中的2g品红中国印染网改用为2g结晶紫。结果弹性纤维显示为绿色。
④在溶化沉淀物时,应隔水溶化,不要直接于明火上加热熔解。
⑤配制后的染液用小磨口瓶装,以防溶液挥发,影响染色效果。
⑥该溶液虽可保存较长时间,但仍以新鲜配制为好。
⑦切片在透明时,有人提出切片不要经过苯酚二甲苯。其原因之一是对已染色的切片有影响。



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2.Gomori’s醛品红法(1950)(Gomrori’s aldehyde-fuchsin method)

(1) 该法特点:
①可把较细的弹性纤维给予显示出来。
②它不但染弹性纤维,也可染胰腺的B细胞,肥大细胞,神经细胞的尼氏小体,表面肝炎抗原(HBsAg)粘蛋白等。
③方法可靠安全,操作得当,可获满意结果。
④颜色鲜艳,利于摄影。
(3)试剂的配制:
碱性品红 1g
70%酒精 98ml
三聚乙醛 1ml
浓盐酸 1ml
将品红溶于酒精里,再加入HCl和三聚乙醛,混合后于室温放置2-3天后即可成熟,保存于4℃冰箱内,使用期1-2个月。
(3)操作方法:
①切片脱蜡至水,
②0.5%高锰酸钾水溶液氧化5min,
③水洗,
④2%草酸漂白1-2min,
⑤水洗,
⑥入70%酒精稍浸泡1min,
⑦入染液中浸染10-15min,
⑧70%酒精分化,至无余色脱下为止,
⑨0.5%橙黄G做对比染色,20-30s,
⑩脱水,透明,封固。
结果:弹性纤维深蓝色,背景不同程度的黄色。
注意事项:
1醛品红液在成熟之后方可使用,染色最佳时间一般在7-10天,
2分化时应随时观察切片,防止褪色过度,可改用95%酒精为分化剂。
3.地衣红技术(Unna.1891)
(orcein techique)
(1)染液:
地衣红 1g
70%酒精 99ml
浓HCL 1ml
将地衣红溶于酒精中,也可以用水浴锅加热以助其溶解,冷却过滤后加入HCL于室温放置1-2天。
(2)操作方法:
①切片脱蜡至70%酒精,
②入上述染液中浸染3h(室温)或1-2h(37℃)
③0%酒精分化,
④脱水,透明,封固。
结果:弹性纤维棕红色或深棕色。
4.Verhoff氏酒精苏木素技术(1908)
(Verhoff’s alcoholic hematoxylin ted)
(1)染液的配制:
A. 5%酒精苏木素.
B. 10%三氯化铁水溶液.
C.lugol’s碘.
溶2g碘片于少数的蒸馏水中,再溶1g的碘化钾,两者总量为100ml。



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(2)操作方法:
①切片脱蜡至水,
②用上述染液(A.2分,B.4分,C.4分)染色10-15min,
③水洗,2%的三氯化铁分化至弹性纤维清晰为止,
④水洗,95%酒精除去沉淀于切片的碘,
⑤水洗,用Van Giesson或中性红作对比染色,
⑥脱水,透明,封固。
结果:弹性纤维黑色,背景据不同的对比染色而定。

特点:①操作简单,易掌握。
②染色的时间短,适宜于临床活检。
注意事项:
①苏木素为储存液,但每次以新配为佳,
②混合后的染液须当次用完,不能保存,
③分化时应于镜下控制,以免过染或淡染。
(三)弹性纤维染色的临床应用
1. 用于区别正常的动脉和静脉以及观察动脉有病变时血管壁各层的情况,如动脉粥样硬化时的各类变化。
2. 用于区别观察各种疾病对弹性纤维的影响及变化,如原发性或继发性高血压可见主动脉弹力纤维增生,老年弹力纤维增多症。心内膜弹力纤维增生症常都可见到弹力纤维断裂,梅毒性主动脉炎和皮肤的环状肉芽肿,动脉粥样硬化均可见到裂解,崩解的弹力纤维。
3. 用于弹力纤维性假黄瘤的诊断。
该病镜下见真皮中下部结缔组织变性,呈团块状或条索状,弱嗜碱性用弹力纤维染色法可以鉴别。
(四)对染好弹力纤维的总结和体会
1.这种方法对固定液没有特殊要求,一般福尔马林固定液即可,但时间不宜过长,过长可影响染色。另外,不要用含有铬酸盐如Zonker氏固定液固定。 中国印染网
2.认真配制好各种试剂。
试剂配制的好坏,直接关系到染色的成败,因此要获得好的染色结果,就必须先配制好试剂,每一种试剂都必须认真仔细操作。在这些方法中,有的可配为储存液,有的则应在临用前配制。应注意的是,在配制Weigert氏雷琐辛品红时,可产生大量的气体,因此要用较大的容器来配制。
3.切片的氧化,漂白。
上述的四种方法,作者都作了大量的对照。取同一病例,分为甲乙两组,甲组的切片的颜色比乙组的鲜艳,这是为什么呢?我们都知道,所有的组织经甲醛固定后,都形成了醛键,这些醛键的存在,影响了组织跟染液发色基团的更好结合。为了使组织能更有效的显示出来,利用某些试剂进行氧化,把这些醛键打开,然后再对切片进行漂白,使切片不含有其它的杂质,着色更纯正,实验证明效果很好。
四 横纹肌染色
(一)横纹肌的一般结构
横纹肌又称骨骼肌,它的肌纤维细长,呈圆柱状并具有横纹肌,直径约10-100um,长度长短不一,长的可达4cm以上,短的只有数mm,一条肌纤维的细胞核最多的可达百余个,分布在纤维的周缘,最近肌膜,细胞核呈扁椭圆形,核附近有小的高尔基复合体,细胞质内有大量与肌纤维长轴平行的肌原纤维,肌原纤维之间有肌质网,线粒体,脂滴,糖元等。
(二)横纹肌的超微结构
1.肌原纤维,每一条肌原纤维有许多明带和暗带互相间隔所构成的横纹。每一条肌原纤维有1-2千条平行的肌丝集束而成,肌丝分为粗肌丝和细肌丝。
①粗肌丝:由许多豆芽状的肌蛋白(ayosin)集合而成。
②细肌丝:由肌动蛋白(action),原肌球蛋白(tropamyosin)和肌原蛋白(troponin)构成。
2. 横小管,在每条肌原纤维的周围,在每一暗带与明带交界处,都缠绕着一条细管,称横小管。

3. 肌质网在肌原纤维的周围,于相邻两条横小管之间,有网状的肌质网。



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(三).横纹肌的染色方法:

1.PTAH法
2.Masson氏液染色法
3.Uan Gieson氏法
1.磷钨酸苏木素染色法
(phsphotungstic atid,hamatoxy lin,PTAH)
1试剂的配制:
磷钨酸苏木素染液
苏木素 0.1g
蒸馏水 100ml
磷钨酸 2g
取一烧杯先将蒸馏水加温,再加入苏木素,加以搅拌,待溶解后才能成熟,才可使用。
2.操作方法:
⑴切片脱蜡至水,
⑵于Zenken氏液中静放一夜,
⑶流水冲洗,
⑷用0.5%碘酒处理10min,
⑸水洗,
⑹5%硫代硫酸钠脱碘5min,
⑺水洗,
⑻高锰酸钾液处理5min,
⑼水洗
⑽2%的草酸液漂白2min,
⑾流水冲洗3min,
⑿入磷钨酸苏木素液染24-48h,
⒀95%酒精快速分化,
⒁脱水透明,封固。
结果:横纹肌纤维,纤维素,胞核,核仁和神经胶原纤维等呈蓝色,胶原纤维,网状纤维,软骨基质呈棕红色,弹力纤维呈紫色。
(四)临床应用:
①横纹肌肉瘤是较常见而且恶性度很高的肉瘤,形态较多,成分复杂,与纤维肉瘤的腺泡状软组织肉瘤及多型性脂肪瘤相混淆,在HE的情况下,它们有许多共同之处,必须靠特殊染色和免疫组化染色。
②横纹肌纤维的脂肪变性。在HE染色时,肌纤维纹理显示不清楚,部分呈空泡状改变。此时的切片与水泡样变性,浊肿时的病变不好区别。
③肌纤维的变性,坏死及其坏死后的修复过程,跟胶原纤维的坏死的HE切片不好区别,PTAH对区别这类切片有帮助。
④用于恶性Mullerican混合瘤的鉴别诊断,该肿瘤镜下结构复杂,典型的表现是癌和肉瘤样成分混合存在,当发现肿瘤细胞有横纹或免疫标记证实骨骼肌标记物阳性者,即可此病中国印染网。


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